在植物中,質(zhì)膜 H + - ATP 酶的功能主要是通過通道和載體將相關(guān)離子和 有機化合物轉(zhuǎn)運穿過質(zhì)膜以外,同時還涉及了植物 正常生長所必需的其他功能,如胞內(nèi) pH 值調(diào)節(jié)、細 胞內(nèi)酸堿度調(diào)節(jié)、細胞生長與擴張,以及植物對環(huán)境 脅迫的響應(yīng)等。因此植物質(zhì)膜 H + - ATP 酶對 植物的生長代謝具有重要意義。筆者在對藥用植物 丹參的研究發(fā)現(xiàn),丹參的胞質(zhì)酸化誘導(dǎo)了質(zhì)膜 H + - ATP 酶活性的增強,且該酶基因的轉(zhuǎn)錄表達也顯著 增加,同時影響了丹參植株中主要的藥用次生代謝 物的合成量。SW - CJ - 2FD 紫外超凈工作臺( 蘇州安泰) , YXQ - LS - 50SII/30SII 立式壓力蒸汽滅菌鍋( 上海 博迅) ,NSKY - 2102C 恒溫培養(yǎng)搖床( 上海蘇坤) ; DNP - 9082 恒溫培養(yǎng)箱( 上海精宏) ,5804R 高速冷 凍離心機( 德國 Eppendorf) ,凝膠電泳儀和電泳槽 ( 北京六一)。
3 mol /L NaCl 鹽脅迫處理后,含有 SmPHA4 基因的 INVSc1 釀酒酵母轉(zhuǎn)化子成活率相 比于參照樣品有所降低( P < 0. 05 或 P < 0. 01) ,而 3 mol /L KCl 鹽脅迫處理后的差異也達到了極顯著 水平( P < 0. 01) ,提示 SmPHA4 基因的表達降低了 INVSc1 釀酒酵母對 3 mol /L NaCl 和 3 mol /L KCl 鹽 脅迫的耐受性,該基因的表達不利于菌株對本試驗 高滲透壓脅迫條件下的調(diào)節(jié)能力。酵母與植物對非生物脅迫應(yīng)答的分子機理更為 相似,因此比原核表達系統(tǒng)更適合用于植物抗逆基 因的篩選,酵母表達系統(tǒng)可以很大程度上體現(xiàn)植物 基因在真核細胞內(nèi)的表達情況和相關(guān)功能。