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        上海精宏

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        真空干燥箱在半夏瀉心湯的工藝改進(jìn)的應(yīng)用

        返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-08-05 15:33【

        我國慢性胃炎、胃潰瘍發(fā)病率較高,統(tǒng)計數(shù)據(jù) 表明,發(fā)病率可達(dá) 60%以上,為臨床上常見多發(fā) 病 ?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療胃炎、胃潰瘍多對癥處理,藥 物多為嗎丁啉和維酶素等,或針對主要致病因素——幽門螺桿菌(helicobacter pylori,HP)多種抗 生素聯(lián)合治療,如采用質(zhì)子泵抑制劑加克拉霉素 加阿莫西林或甲硝唑三聯(lián)療法 。雖然取得一定 療效,但愈后復(fù)發(fā)率高,且病程又長,服藥時間長,還帶來胃腸道不適、失眠、頭昏、頭痛等副作用,尤 其是隨著抗生素的廣泛使用,HP對常用抗生素的 耐藥情況日益嚴(yán)重 。


        1 實驗部分

        1.1 儀器及材料


        T2K202中試提取機(jī)組、2K00401濃縮機(jī)組(江 漢醫(yī)療制藥設(shè)備有限公司),2002 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海申勝生物技術(shù)有限公司),DZF6050 型真空干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司),CCPP-176 聚丙烯層析柱(天津市德固特科技發(fā)展有限公 司),Wistar 大鼠[(200±10)g,湖北中醫(yī)藥大學(xué)], 姜半夏、干姜、黃芩、黃連、黨參、灸甘草、大棗(湖 北強(qiáng)康中藥飲片有限公司),AB-8樹脂(安徽三星樹脂有限公司),質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%乙醇(藥用級,湖南 爾康制藥股份有限公司),水為注射用水(湖北科 益藥業(yè)股份有限公司)。



        1.2 試驗方法

        1.2.1 樣品1 


        水提對照樣品制備:稱取姜半夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、 黃連2 kg、大棗2 kg,煎煮2次,每次2 h,第一次加 水 200 L,第二次加水 160 L,合并提取液,孔徑為 150 μm篩過濾,減壓濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至 細(xì)粉備用。



        1.2.2 樣品2

        20%乙醇提取組分制備:稱取姜半 夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、黃連 2 kg、大棗2 kg,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%乙醇 (以下簡稱20%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 20%乙醇 200 L,第 2 次加 20%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過濾,將濾液減壓濃 縮至相對密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹脂柱(20 kg AB-8樹脂裝柱,樹脂重量 為藥材重量的1倍),用20%乙醇85 L(為大孔吸附 樹脂柱體積的5倍)洗脫樹脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至細(xì)粉備用。



        1.2.3 樣品3

        40%乙醇提取組分制備:稱取姜半 夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、黃連 2 kg、大棗2 kg,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%乙醇 (以下簡稱40%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 40%乙醇 200 L,第 2 次加 40%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過濾,將濾液減壓濃 縮至相對密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹脂柱(20 kg AB-8樹脂裝柱,樹脂重量 為藥材重量的1倍),用40%乙醇85 L(為大孔吸附 樹脂柱體積的5倍)洗脫樹脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60℃真空干燥,粉碎至細(xì)粉備用。



        1.2.4 樣品4

        60%乙醇提取組分制備:稱取姜半 夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%乙醇 (以下簡稱60%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 60%乙醇 200 L,第 2 次加 60%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過濾,將濾液減壓濃 縮至相對密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹脂柱(20 kg AB-8樹脂裝柱,樹脂重量 為藥材重量的1倍),用60%乙醇85 L(為大孔吸附 樹脂柱體積的5倍)洗脫樹脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至細(xì)粉備用。

        1.2.5 樣品5

         

        80%乙醇提取組分的制備:稱取姜 半夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%乙醇 (以下簡稱80%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 80%乙醇 200 L,第 2 次加 80%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過濾,將濾液減壓濃 縮至相對密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹脂柱(20 kg AB-8樹脂裝柱,樹脂重量 為藥材重量的1倍),用80%乙醇85 L(為大孔吸附 樹脂柱體積的5倍)洗脫樹脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至細(xì)粉備用。



        1.3 提取組分藥效試驗

        1.3.1 對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的抑制作用研究


        取健康Wistar大鼠,隨機(jī)分為正常對照組、樣 品1~5組,每組均10只,雌雄各半。1~5組的給 藥劑量相同,即將干膏折算成生藥材的重量,按 10 g生藥材每1 kg體重進(jìn)行灌胃給藥,正常對照組 給予等容量蒸餾水。試驗第一天上午各組分別灌 胃1次,下午開始禁食不禁水,第二、三天上午再分 別灌胃 1 次,第三天下午(即禁食 48 h 后)開始手 術(shù)。手術(shù)時,將大鼠用乙醚麻醉、沿腹中線切開腹 壁,找出胃與十二指腸,用縫合線避開血管結(jié)扎胃 幽門與十二指腸結(jié)合部,并由十二指腸再給藥一 次,隨后縫合腹壁、碘酊消毒后放回籠中,同時禁 食禁水。18 h后,拉頸椎處死大鼠,剖腹取出胃并 收集胃液,隨即向胃內(nèi)注入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%福爾馬 林溶液10 mL,再將胃放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%福爾馬林 溶液中固定 10 min 以上。然后沿胃大彎剪開胃, 將其平展于玻璃板上,仔細(xì)觀察前胃部粘膜潰瘍 的發(fā)生情況,并按下述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潰瘍分級。0:無 潰瘍;1:潰瘍點、出血點(<1 mm);2:1~5 個小 潰瘍(>1 mm,<3 mm);3:6個以上小潰瘍或1個 大潰瘍(>3 mm);4:2個以上大潰瘍;5:穿孔性潰 瘍 。



        1.3.2 抗炎作用研究

        取健康 Wistar 大鼠,隨機(jī) 分為正常對照組、樣品1~5組,每組均10只,雌雄 各半。進(jìn)行灌胃給藥,正常對照組給予等容量蒸餾水。 連續(xù) 3 d,每天灌胃一次,最后一次灌胃后 0.5 h, 從大鼠左后肢足趾皮下注射新鮮蛋清0.1 毫升/只 致炎。致炎前測量一次踝關(guān)節(jié)周長,并于致炎后 2 h分別測量一次踝關(guān)節(jié)周長,計算關(guān)節(jié)腫脹率 。



        1.3.3 抗幽門螺桿菌(HP)作用研究

        幽門螺桿菌 (HP)是一種革蘭陰性需氧螺桿菌,目前全世界超 過50%的人受其感染,是導(dǎo)致胃炎、胃潰瘍的一種 最常見致病因素,WHO將其定為胃的Ⅰ類致病因 子 。本試驗將考察不同分離部位對HP 的殺滅 效果。取健康Wistar大鼠,隨機(jī)分為正常對照組、無治療藥物組、樣品1~5組、每組均10只,雌雄各 半。除正常對照組外其余各組連續(xù)10天空腹灌胃 食醋2.5 mL/只;第11天,采用空腹束縛水浴6 h;從 第 12 天起,上述隔天空腹灌胃 HP 混懸液(1×109 CFU/mL)1.5 mL/只,共3次;第16天除正常對照組 和無治療藥物模型對照組外其余各組灌胃給藥, 連續(xù)給藥 10 天。第 25 天下午所有組動物禁食過 夜,次日將各組動物脫頸椎處死,在無菌的條件 下,取胃粘膜快速進(jìn)行尿素酶試驗和 HP 接種培 養(yǎng),同時直接涂片觀察HP陽性率。



        2 結(jié)果與討論

        2.1 提取組分對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的抑制作


        用藥效結(jié)果 各提取組分對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的抑制 作用藥效試驗結(jié)果用t值法進(jìn)行統(tǒng)計分析,結(jié)果見 表1。



        藥效結(jié)果顯示,采用 40%乙醇提取和洗脫得 到的提取組分(樣品3)對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍 具有顯著的抑制作用,效果略優(yōu)于傳統(tǒng)水煎,表明 該分離部位對胃潰瘍有較好的治療作用。



        3 結(jié) 論

        本研究對半夏瀉心湯提取方法進(jìn)行工藝改 進(jìn),采用不同濃度的乙醇提取和純化,得到不同的 提取組分,通過藥效試驗考察各提取組分抑制胃 潰瘍、抗炎以及殺滅HP的作用,并與古代水煎工 藝進(jìn)行對比。結(jié)果表明,采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 40%乙 醇提取,并通過AB-8樹脂富集,5倍量樹脂體積的 40%乙醇洗脫得到的提取組分對胃炎、胃潰瘍有 良好的治療作用,在不影響藥效的前提下,大大減 少了患者的服用量,為將古方制備成方便服用、質(zhì) 量可控、易保存現(xiàn)代制劑(顆粒、片劑、膠囊、口服 液等)提供了技術(shù)和理論依據(jù)。

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