三七是一 種十分古老的藥用植物， 起源于 25 萬年前的第三紀 古亞熱帶區(qū)域，又名鬧特金身、諾特參（ 音譯） [1]。 三七 為云南道地藥材，具有止血散瘀、消腫定痛的作用[2]， 是許多知名中成藥的主要原料，如：痛 舒 膠 囊、痛 舒 片、復方丹參滴丸、丹參片等?！?本草綱目》 記載：“ 凡杖 撲傷損，癖血淋漓者，隨即嚼爛罨之即止，青腫者即消 散[3] ”。 這表明三七不僅有止血作用還有活血散瘀的 神奇功效，具有雙重調(diào)節(jié)作用。 大孔吸附樹脂柱色譜 為常用的劃段方法， 各段洗脫物中化學成分的種類、 含量、藥效強弱均不一致。 目前，從大孔樹脂劃段，主 要成分種類和含量分析，藥效等方面對三七進行系統(tǒng) 性研究的報道較少。 本文對三七水洗脫部位，30%和 70%乙醇洗脫部位進行研究， 旨在篩選活性部位，探 討各部位主要成分的種類與含量，止血與活血作用強 弱，為三七標準化建設提供物質(zhì)基礎研究依據(jù)。

三七主根，灰褐色圓錐形，具清香 味，由云南白藥集團股份有限公司創(chuàng)新研發(fā)中心天然 藥物資源研究室提供，經(jīng)資源研究室鑒定為五加科人 參屬植物三七（ Panax notoginseng（ Burk.） F. H. Chen） 的干燥根；HPD-100 型大孔吸附樹脂，滄州寶恩吸附 材料 科 技 有 限 公 司；三 七 素、三 七 總 皂 苷、人 參 皂 苷 Rg1 對 照品，中國藥品生物制品檢定研究院；色 譜 級 乙腈、甲醇，德國默克，批號：20180331；無水乙醇，國 藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)， 批號：20170530。 云 南 白 藥 ， 云南白藥集團股份有限公司 ， 批 號 ： ZLA1614；阿司匹林腸溶 片，Bayer HealthCare Manu－ facturing S.r.l， 批號：BJ19198.； 膠原蛋白，Sigma，批 號：BPo2o1；鹽酸腎上腺素注射 液，上海禾豐制藥有 限公司，批號：10170102；銀杏葉提取物，德國威瑪舒 培博士藥廠，批號：0320417；高分子右旋糖酐，瑪雅試 劑有限公司，批號：MAYA-CR-6536；水合氯醛，國藥集團化學試劑有限公司，批號：2015050。

旋 轉 蒸 發(fā) 儀， 上海亞榮； DZF-6051 型真空干燥箱 ， 上海精宏儀器廠 ；Prac－tum224-1CN電子分析天平，賽多利斯科學儀器（ 北 京） 有限公司；JJ-2000 型電子天平，江蘇常熟市雙杰 測 試 儀 器 廠；UV2501分光光度計， 日 本 Shimadzu； Waters e2695 型高效液相色譜儀，美國 Waters；ELGA reservoir 75 L 純 水 機，英 國 ELGA；全自動全血血液流變儀 MVIS-2015，重慶天海醫(yī)療設備有限公司。

SPF 級昆明小鼠， 體質(zhì)量 20~22 g。 SPF 級 SD 大鼠，體質(zhì)量 180~220 g。 來源于廣東醫(yī)學 實驗動物中心[SCXK（ 粵） 2013-0002]。 動物飼養(yǎng)于云 南白藥集團創(chuàng)新研發(fā)中心藥理研究室 [SYXK （ 滇） K2017-0004]。

三七干燥根 6 kg，粉碎，以 70%乙醇為提取溶劑（ 料液比為 1 ∶ 5） ，采 用連續(xù)回流提取法提取 3 次，回流溫度為 80 ℃，每次 2 h。 所得提取液趁熱過 200 目濾布，使用旋轉蒸發(fā)儀 減壓濃縮（ 溫度：60 ℃，真空度：0.07 MPa） ，稠膏減壓 真空干燥。 三七干燥藥材 4 kg（ 60 頭） ，依上述方法制得濃 縮液 500 mL。 稱取 4 kg 的 HPD-100 大孔吸附樹脂 預 處 理，裝 入 16 cm×140 cm 的 玻 璃 色 譜 柱 中，用 蒸 餾水替換。 取濃縮液均勻上樣，流速 10 mL/min。 依次 用 5 倍柱體積的蒸餾水、30%和 70%的乙醇-水梯度 洗脫，流速 200 mL/min。 將各部分洗脫液使用旋轉蒸 發(fā)儀減壓濃縮（ 溫度：60 ℃，真空度：0.07 MPa） 。 水洗 脫部位濃縮液經(jīng)水?。?70 ℃） 蒸發(fā)至稠狀，減壓真 空 干燥（ 溫度：70 ℃，真空度：0.07 MPa） 。 30%和 70%乙 醇洗脫部位濃縮后冷凍干燥。

對照品制備：稱取 三七素對照品 10.01 mg，配置時加 70%甲醇，溶解定 容到 25 mL。供試品制備： 稱取適量三七總提物和各劃段 樣 品，用純水定容置至 25 mL，超聲溶解，有機系濾頭過 濾，取續(xù)濾液進樣 10 μL。 測定方法：Waters e2695 型高效液相色譜，Ther－ mo Scientific Hypersil GOLD C18 色譜柱（ 4.6 mm×250 mm，5 μm） ；流動相為 0.3%四丁基氫氧化銨（ A） —甲 醇 （ B）（ 磷酸調(diào) pH 4.0） ； 梯度洗脫 0～15 min，15%～ 20%A；15～25 min，20%～15% A；體積流量 1 mL/min； 進樣量 10 μL；柱溫 25 ℃；檢測波長 220 nm[4]。

對照品溶 液的制備：精密稱取人參皂苷 Rg1 對照品 適量，用甲 醇配制成濃度為 0.2 422 mg/mL 的對照品溶液。 供試品溶液 的 制 備：取 三 七 提 取 物 20 mg，精 密 稱定，加入甲醇 25 mL，超聲混勻，濾過，取續(xù)濾液。 紫外分光光度法標準曲線制備：分別精密吸取對 照品溶液 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 置具塞磨口試 管中，揮干甲醇后，加入新鮮配制的 5%香蘭素-冰醋 酸 溶 液 0.2 mL，高 氯 酸 0.8 mL，于 60℃水 浴 加 熱 15 min，冰水浴 冷 卻 后，加 冰 醋 酸 5 mL 搖 勻，于 紫 外 分 光光度計 545 nm 處進行測定，以吸光度值 Y 為縱坐 標，以人參皂苷 Rg1 含量 X（ mg） 為橫坐標繪制標準曲 線。 供試品反應與測定： 精密吸取供試品溶液 0.2 mL，置具塞磨口試管中，揮干甲醇后，加入新 鮮配制 的 5%香蘭素-冰醋酸溶液 0.2 mL， 高氯酸 0.8 m，于 60 ℃水浴加熱 15 min， 冰水浴冷卻后， 加冰醋酸 5 mL 搖勻，以不加供試品的試劑做空白對照，于紫外分 光光度計 545 nm 處進行測定[5-6]。

對照品的 制備： 稱取三七總皂苷對照品 63.01 mg， 配置時加 70%甲醇，溶解定容到 25 mL。 配置濃度：2.5 204 mg/ mL。 標 示 含 量 ：R1：7.4%、Rg1：26.3%、Re：3.7%、Rb1： 27.7%、Rd：7.6%。 供試品溶液的制備：稱取 30%乙醇洗脫部位凍干 粉末 50.7 mg，30%甲醇定容置至 25 mL， 超聲溶解， 有機系濾頭過濾，取續(xù)濾液進樣 10 μL；稱取 70%乙 醇洗脫部位 50.3 mg， 甲醇定容置至 25 mL， 超聲溶 解，濾頭過濾，取續(xù)濾液進樣 10 μL。 HPLC 色譜條件：色譜柱：Ecosil-C18 柱（ 250 mm× 4.6 mm，5 μm） ；流 速：1.0 mL/min；柱 溫：30 ℃；進 樣 量：10 μL；檢測波長：203 nm；流動相：乙腈-水溶液， 按表 1 進行梯度洗脫[7]。

2 實驗結果

2.1 藥材提取與大孔樹脂柱層析

提取得到干燥的 總提物 1.38 kg，得率 23%。 水洗脫部位 370 g，30%乙 醇洗脫部位 82 g，70%乙醇洗脫部位 330 g，得率分別 為：9.25%、2.05%、8.25%。

對三七總提物和 各劃段樣品進行了三七素含量檢測。 結果顯示，總提 物和水洗脫部位中含有三七素，含量分別為 1.13%和 2.78%。30%和 70%乙醇洗脫部位均未檢測到三七素。如表 2 所示。

三七總皂 苷測定結果顯示，總提物中含量為 32.51%。 70%乙醇 洗脫部位中含量最高，達 83.61%。 30%乙醇洗脫部位 中含量為 52.39%，水洗脫部位中含量為 0%。 如表 2 所示。 2.4 HPLC 法測定 5 種主要皂苷的含量 與三七總 皂苷對照品比較，對 30%和 70%乙醇洗脫部位中的 5 種 主 要 皂 苷（ 三 七 皂 苷 R1，人 參 皂 苷 Rg1，人 參 皂 苷 Re，人參皂苷 Rb1，人參皂苷 Rd） 進行了測定。 5 種皂 苷在 70%乙醇洗脫部位中均有檢出， 而 30%乙醇洗 脫部位中僅檢出三七皂苷 R1，人參皂苷 Rg1，人 參 皂 苷 Re。含量計算如表 2 所示。

3 討論

提取與大孔樹脂柱劃段研究中，采用 70%乙醇提 取，能較大范圍地提取三七化學成分。 根據(jù)大孔樹脂 柱特性，水洗脫部位富集了較多強極性化合物，如：三七素、多糖、強極性苷類等。隨著洗脫劑中乙醇含量增 加， 所得洗脫物極性減小，30%和 70%乙醇洗脫部位 能較多地富集核苷、黃酮苷、三萜苷及其苷元等化合物。

在本實驗設計與條件下，水洗脫部位的三七素含 量最高， 止血作用最強，30%和 70%乙醇洗脫部位中 主要皂苷的種類與含量存在著較大差異，藥效研究顯 示 ，30%乙醇洗脫部位為抗血 栓的主要活性部位 ， 30%和 70%乙醇洗脫部位均為活血散瘀作用的主要 活性部位。本文從大孔樹脂劃段，成分比較分析，藥效 對三七進行了系統(tǒng)地實驗，在一定程度上豐富了三七 的研究成果。 后期我們將對活性部位展開進一步研 究，為三七標準化的建立提供理論依據(jù)。