1 材料與方法
果膠酶(30 000 U/g):山東隆大生物生物工程有限公司; E.Z.N.ATM Mag-Bind Soil脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)Kit試劑盒:美國OMEGA公司;2×Taq Master Mix:南京諾唯贊生物科技有限公司;Qubit 3.0 DNA檢測試 劑盒:美國Thermo Fisher Scientific公司。SHP-250生化培養(yǎng)箱:上海精宏實驗設(shè)備有限公司; 5424臺式高速離心機:德國Eppendorf公司;FE20K pH計:瑞 士梅特勒-托利多公司;DYCP-31C水平電泳儀:北京市六一 儀器廠;C1000聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction, PCR)儀:美國BIO-RAD公司。
2 結(jié)果與分析
黑樹莓酒的自然AF共進(jìn)行了7 d,發(fā)酵過程中通過測定 還原糖濃度來監(jiān)測發(fā)酵過程。由于酒精發(fā)酵過程中酵母是 優(yōu)勢菌群,所以真菌多樣性分析成為了黑樹莓酒自然AF 的研究重點。在AF的初期(第1天)、中期(第3天)和后期 (第6天)分別取樣,記為BU1、BU3和BU6,進(jìn)行高通量測 序后實施系統(tǒng)分析。隨著測 序深度的增加,OTU的數(shù)量隨之增多,且樣品的Shannon曲 線都已經(jīng)進(jìn)入平臺期階段。結(jié)果表明,測序數(shù)量充足,并且 能夠反映出黑樹莓酒MLF發(fā)酵過程當(dāng)中絕大多數(shù)細(xì)菌的 信息。還可以增強酒中微生物的穩(wěn) 定性。在自然發(fā)酵的果酒中,Lactococcus和Lactobacillus 的檢出率一般較高,本研究中Lactococcus的相對豐度 一直維持在4.44%~17.11%,而Lactobacillus則含量較低, 推測可能是黑樹莓酒的高酸度環(huán)境抑制了乳桿菌生長, 不利于其增殖。
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